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  随着科技的进步,利用完善成熟的软件进行小动物行为实验已经越来越普遍。老猫在这里推荐两款上海新软的小动物行为分析软件Supermaze小动物行为分析软件,XR-Xmaze和上海新软。   

  

  Supermaze标准版:支持旷场实验、Morris水迷宫、高架十字迷宫实验、Y迷宫、T迷宫、新奇物体识别等行为实验。并能生成行为轨迹图、行为记录、接触区域潜伏期、接触区域次数等。Visutrack小动物行为分析软件,XR-VT,上海欣柔   

  

  -高端版Visutrack:包含Supermaze的所有行为模块,更支持尾部悬吊、强迫游泳、条件恐惧等实验。生产的参数比supermaze更丰富:行为轨迹图、行为热图、行为记录表、区域偏好指数等。并对数据分析进行了优化,方便研究人员整理数据。让我们用一个实际的实验案例来看看软件分析的效果:   

  

  原文为王 黎,史清海等老师发表的 《银杏内脂对急性缺氧后大鼠 焦虑样行为的干预作用》   

  

  由于缺氧、低气压、强紫外线等一系列环境条件。高原特有的,战士在冲入高原的过程中,往往伴随着生理和心理的应激反应。其中,心理应激可使人产生焦虑、抑郁甚至精神分裂症等情绪变化,严重影响军队战斗力。因此,研究能有效预防或治疗急性缺氧引起的焦虑样情绪的药物非常重要。   

  

  B(银杏内酯B (GB)是银杏叶提取物中的主要成分之一,主要为萜类内酯。前期研究表明,GB可以抑制急性缺氧下神经细胞的凋亡和氧化应激,从而保护神经细胞,减轻大鼠认知功能障碍。本研究作者推测,GB对神经细胞的这种保护作用也可能改善缺氧引起的焦虑行为。然而,另一份报告显示,虽然银杏叶提取物化合物(包括银杏内酯A、B、C和白果内酯)在动物实验中可以抑制小鼠的焦虑样行为,但这种抗焦虑作用主要是由银杏内酯A提供的,而不是GB。为探讨银杏叶提取物是否具有抗焦虑作用,本研究采用旷场实验(OFT)和高架十字迷宫(EPM)评价急性缺氧条件下大鼠的焦虑样行为,以期为防治缺氧性焦虑提供新的药物选择。   

  

  1材料和方法1.1实验动物   

  

  SPF级成年雄性SD大鼠36只,体重(20020)g,购自新疆医科大学动物实验中心,实验动物质量合格证号为20111125008。   

  

  1.2试剂与仪器   

  

  高原人工实验舱;Epm实验仪(型号:XR-XG201,上海新软信息技术有限公司);OFT实验仪(型号:xr-xz301xr-xz301,上海新软信息技术有限公司);Supermaze动物行为视频分析系统(上海新软信息技术有限公司);GB(文章编号:C31J6G2014,纯度& gt98%).高架十字迷宫,EPM,XR-XG201,上海新柔   

  

  开放实验箱,OFT,XR-XZ301,上海新柔   

  

  1.实验SD大鼠饲养方法及分组   

  

  SD大鼠被喂养并适应新环境3天。所有大鼠均饲养在动物室内,室内温度保持在(251),每天12小时,昼夜交替。它们被喂以同一种饲料,它们可以自由地吃喝。玉米粒做垫料,两天换一次。将大鼠分为平原对照组、高原缺氧组和GB干预组,每组12只。其中,GB干预组大鼠在进入高原人工实验舱前,每天定时灌胃120 mg/kg GB,连续给药4天后,与缺氧组大鼠一起进入高原人工实验舱。对照组的普通大鼠在常规条件下饲养在动物房中。   

  

  1.模拟急进高原条件   

  

  将GB干预组和高原低氧组大鼠同时置于特殊环境的人工实验舱中,以25 m/s的速度快速上升到6 000 m的海拔高度,自然昼夜交替24小时。以5.5 L/min的速度连续注入新鲜空气,提供饲养动物所需的氧气,同时排出二氧化碳。舱内温度保持在(242),湿度为40% ~ 50%。老鼠可以自由进食和饮水。实验过程中观察大鼠在高空暴露时的饮食、活动、情绪等状态,在舱内暴露6天后出舱进行动物行为实验评价。   

  

  1.5动物行为学实验   

  

  实验开始前,彻底清洁实验装置,用窗帘将OFT和EPM与外界环境隔开,保持室内黑暗(以1.5m距离处亮度最低为准),室温20左右明亮。考试的时候留着。   

周围环境安静。设置好相关程序参数,其中摄影记录为延迟5s记录,共记录300s。大鼠出舱后将其放置在实验室半小时以适应环境。实验开始时,将大鼠背对实验者从笼中取出(每次一只大鼠),放入旷场以及十字迷宫装置的中心,实验者立刻离开,使用动物行为轨迹跟踪系统采集大鼠在300s内的活动信息。每只大鼠在完成测试后,使用75%酒精将设备擦洗干净后,再进行下一只大鼠的测试。

  

1.6实验中需要记录的评价指标

  

OFT实验动物出现焦虑心理时,其对开阔环境和新异环境中的恐惧和探究的矛盾心理特性会反应在行为学上,表现为焦虑越严重,就越倾向于在周边区域活动,以获得一种安全感。因此,实验动物进入中央区域的次数越多,在中央区域活动的时间越长则说明动物的焦虑情绪越低。观察实验动物的运动总路程(Cm)、进入中心区域时间(s)、进入中心区域次数(n)。EPM实验主要是利用动物对新异环境的探究和对高悬开臂的恐惧形成矛盾心理来反应动物的焦虑状态。大鼠进入开臂时间和次数越多,说明大鼠焦虑程度越低,反之则说明其焦虑程度越高。观察实验动物的运动总路程(cm)、开臂时间百分比(%)、开臂次数百分比(%)。

  

1.7统计学处理

  

采用SPSS16.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差(x珚±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义。

  

2结果2.1 OFT结果

  

由动物行为轨迹跟踪系统采集的大鼠运动轨迹可以看到高原缺氧组大鼠相较于平原对照组大鼠在中央区域的运动轨迹明显减少,而GB干预组大鼠在中央区域的活动时间则和平原对照组相近,见图1。统计学分析后可以看出在到运动总路程、进入中心区域时间和次数上,高原缺氧组显著低于平原对照组和GB干预组,组间比较差异具有统计学意义(F=10.991,P<0.01),而平原对照组和GB干预组之间比较差异无统计学意义(P>0.05),GB干预组与高原缺氧组比较差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。以上结果说明高原缺氧环境会导致大鼠产生焦虑样行为,而GB的预给药可以改善大鼠的焦虑状态。

  

  

Supermaze小动物行为分析软件,行动轨迹图,上海欣软

  

  

2.2 EPM实验结果

  

由动物行为轨迹跟踪系统采集的大鼠运动轨迹可以看出高原缺氧组大鼠相较于平原对照组大鼠在开臂区的运动轨迹明显减少,而GB干预组大鼠在开臂区的活动时间则和平原对照组相近,见图2。运动总路程、开臂区活动时间百分比和进入次数百分比上,高原缺氧组显著低于平原对照组和GB干预组,组间比较差异具有统计学意义(F=11.016,P<0.05),但平原对照组与GB干预组之间比较差异无统计学意义(P>0.05),GB干预组与高原缺氧组比较差异具有统计学意义(P<0.05),见表2。

  

  

Supermaze小动物行为分析软件,行动轨迹图,上海欣软

  

  

3讨论焦虑是动物个体在面对潜在威胁和压力时产生的一种正常情绪反应,人体在急进高原后,由于低压、缺氧、强紫外线等环境的变化会造成一系列应激反应,从而产生焦虑、抑郁的心理应激改变,会对正常的生活和工作造成负面影响。有研究表明高原驻防官兵中存在大量焦虑、抑郁等心理症状的个体,并且这种焦虑和抑郁状态可增加慢性高原疾病的的发病风险,严重影响官兵的身心健康。近年来,传统中药在抗焦虑方面的作用得到越来越多的关注,有研究报道,红景天可通过增高海马神经细胞中的5-羟色胺含量,从而降低缺氧刺激下大鼠的焦虑样行为。另一中成药芪参复康胶囊也被证明有明显的抗焦虑抗抑郁的作用,效果甚至优于红景天。而本文则选用了另一种传统中药GB,并对其潜在的抗焦虑作用进行了初步研究。

  

本研究采用oFT和ePM两个经典实验来评价动物焦虑样行为。oFT的运动总路程反应大鼠的兴奋性,本实验可见GB干预组的运动总路程显著高于高原缺氧组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05),表明GB能改善缺氧造成的大鼠兴奋性下降。而ePM实验中,高原缺氧组大鼠进入开臂的时间和次数显著低于平原对照组和GB干预组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05),说明GB缓解了大鼠的焦虑情绪。本研究通过以上行为学实验,初步探讨了GB对缺氧导致的大鼠焦虑样行为的改善作用,但本研究实验设计仍存在一定问题,首先作者参考之前研究结果只选用了120mG/kG这一个最大用药剂量,而没有进行药物梯度的设定,不能说明GB的抗焦虑效果是否有药物剂量依赖性。其次,临床上对于病理性焦虑的治疗常采用苯二氮卓类药物,如地西泮,该类药物是通过作用于抑制性递质γ-氨基丁酸A受体的ZA位点发挥其抗焦虑效应。因此在动物焦虑模型的相关研究中常使用地西泮做为阳性对照药物,而本实验中没有设立阳性对照组,降低了本实验结果的可靠性。以上问题都是接下来研究中需要改进的。

  

缺氧导致的焦虑是一个复杂的病理生理变化,牵涉到神经生化、神经内分泌等多方面的变化,其中神经递质5-羟色胺在焦虑动物模型中有显著的表达变化,其参与焦虑的产生由不同的受体介导。有研究表明GB可以阻断5-HT(3)A受体,提示这可能是GB发挥抗焦虑作用的机制之一。在中枢神经系统中,参与情绪调节的脑区,包括杏仁核、前额皮质、丘脑、海马和扣带回等脑部结构。其中,海马是参与情绪调节非常重要的脑区,在情绪变化、应激等信息整合过程中起主要作用,同时也是大量研究者观察神经可塑性变化的脑区。本课题组前期研究已经发现,在低压低氧条件下,GB可以改善大鼠的认知功能障碍,提示其潜在的保护海马神经元作用,这可能也是GB具有抗焦虑作用的原因之一。综上所述,本研究初步探讨了GB对缺氧导致的大鼠焦虑样行为的改善作用,为进一步探讨GB抗焦虑机制提供了稳定的动物模型和药物剂量参考。

  



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