以Entranster-E 电转染试剂为例 　　

　　一、HepG2细胞的电转染条件是什么？ 　　

　　使用Entranster-E电转染和指数衰减脉冲电转染仪的HepG2细胞的电转染条件如下： 　　

　　对于0.2 cm的电迁移杯，细胞密度为5 10 6细胞/ml，DNA的量为2g，电迁移溶液的体积为100l，电压为170V，电容为950 f。对于0.4 cm的电迁移杯，细胞密度为5 10 6细胞/ml，DNA的量为5g，电迁移溶液的体积为250l，电压为250V，电容为950 f 　　

　　使用Entranster-E电迁移和指数衰减脉冲电迁移仪的Hela细胞的电迁移条件如下： 　　

　　对于0.2cm的电迁移杯，细胞密度为3 10 6细胞/ml，DNA量为2g，电迁移液体积为100l，电压为130V，电容为950 f。对于0.4cm的电迁移杯，细胞密度为3 10 6细胞/ml，DNA量为5g，电迁移溶液体积为250l，电压为260V，电容为950 f 　　

　　使用Entranster-E电迁移和指数衰减脉冲电迁移仪的BHK-21或Jurkat E6-1细胞的电迁移条件如下： 　　

　　对于0.2 cm的电迁移杯，细胞密度为10 10 6细胞/ml，DNA的量为2g，电迁移溶液的体积为100l，电压为150V，电容为950 f。对于0.4 cm的电迁移杯，细胞密度为10 10 6细胞/ml，DNA的量为5g，电迁移溶液的体积为250l，电压为280V，电容为950 f 　　

　　当进行电穿孔实验时，需要确定每种细胞类型的最佳细胞密度，以最大化电穿孔效率。对于Entranster-E电转染试剂，在含有电转染试剂的最终系统中，电穿孔过程中的细胞密度通常在1-10 10 6细胞/ml的范围内。对于悬浮细胞，最好具有接近10 10 6细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞，推荐的细胞密度为1-5 10 6细胞/ml。对于0.2厘米和0.4厘米的电迁移杯，每个电迁移杯中电迁移溶液的最终体积分别为0.1毫升和0.25毫升。 　　

　　二、Hela细胞的电转染条件是什么？ 　　

　　对于Entranster-E转染试剂，当使用0.4cm电动转子时，大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000 F的电容范围内。对于0.2 cm电动转子，这些范围分别为80-160 V和800-1000F。对于使用0.4 cm电动转子的电穿孔实验，测试电压范围为200-300 V，电容范围为800-1000 F。首先，保持电压恒定在220 V，从750 F开始以100F的增量改变电容。然后，从200 V开始，以10 V的梯度改变电压，同时电容恒定。 　　

　　三、BHK-21细胞、Jurkat E6-1细胞的电转染条件是什么？ 　　

　　一般来说，方波脉冲的理论启动条件可以用指数衰减参数来确定，即在保持电容不变的情况下，脉冲长度减半，电压增加10%左右。之后，优化可以在理论计算的脉冲电压附近以10 V的梯度增加或减少。如果不知道指数衰减脉冲条件，可以通过测试电压、电容、脉冲长度范围来寻找最佳方波脉冲条件。当使用0.4cm电动转子时，大多数电池类型的一般方波脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000 F的电容范围内。对于0.2 cm电动转子，范围分别为80-160 V和800-1000F。脉冲长度从10-20毫秒不等。 　　

　　四、电穿孔实验时的细胞密度是多少？ 　　

　　每种细胞类型在电转染后都有最佳的孵育时间。对于质粒的电转染，最佳孵育时间一般为12-48小时，具体最佳时间应根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。