原则 　　

　　

　　琼脂糖是由D-和L-半乳糖残基通过 (13)和 (14)糖苷键交替组成的线性聚合物。L-半乳糖残基在位置3和6之间形成脱水键。琼脂糖链形成螺旋纤维，然后聚合成半径为20~30 nm的超螺旋结构。 　　

　　

　　材料和仪器 　　

　　

　　样本DNA大小标准 　　

　　

　　琼脂糖溶液电泳缓冲液溴化乙锭或SYBR金染色凝胶加载缓冲液 　　

　　

　　琼脂糖凝胶电泳仪封带微波炉或沸水浴电源装置水浴 　　

　　

　　步骤 　　

　　

　　一.材料 　　

　　

　　1.缓冲液和溶液 　　

　　

　　琼脂糖溶液 　　

　　

　　电泳缓冲液(常用1X TAE或0.5X TBE) 　　

　　

　　溴化乙锭或SYBR金染色溶液 　　

　　

　　6X凝胶加载缓冲液 　　

　　

　　2.核酸和寡核苷酸 　　

　　

　　DNA样本 　　

　　

　　DNA大小标准 　　

　　

　　3.专用设备 　　

　　

　　琼脂糖凝胶电泳仪 　　

　　

　　封条 　　

　　

　　或者微波炉或者沸水浴。 　　

　　

　　可提供500V和200mA电源装置。 　　

　　

　　50水浴 　　

　　

　　第二，方法 　　

　　

　　1.用封边胶带密封塑料托盘的开口侧或清洁干燥的玻璃板的边缘，以形成模具，并将其放置在水平支架上。 　　

　　

　　2.准备足够的电泳缓冲液(1X TAE或0.5X TBE)以填充电泳槽并制备凝胶。 　　

　　

　　3.根据待分离DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制适当浓度的琼脂糖溶液：准确称取干燥的琼脂糖粉末，加入装有一定量电泳缓冲液的三角瓶中或玻璃瓶中。 　　

　　

　　4.使用Kimwipes松散地塞住烧瓶(如玻璃瓶)的瓶颈，必须将其松散地盖住。在沸水浴或微波炉中加热，直到琼脂糖熔化。 　　

　　

　　5.用隔离手套或夹子将三角瓶或玻璃瓶转移到55水浴中。待融化的凝胶稍微冷却后，加入溴化乙锭，终浓度为0.5 g/ml。轻轻旋转以彻底混合凝胶溶液。 　　

　　

　　6.当琼脂糖溶液冷却时，用合适的梳子形成加样孔。梳齿的位置应在托盘底面0.5~1.0 mm，这样当琼脂糖倒入托盘时，就会形成符合要求的加样孔。 　　

　　

　　7.将温热的琼脂糖溶液倒入模具中。 　　

　　

　　8.让凝胶溶液在室温下完全凝固30~45分钟。在凝胶顶部加入少量电泳缓冲液，小心拔出梳子。倒出电泳缓冲液。轻轻撕掉封边胶带，将凝胶放入电泳槽中。 　　

　　

　　9.向电泳槽中加入电泳缓冲液，刚好超过凝胶约1 mm。 　　

　　

　　10.将DNA样品与0.2倍体积的6X样品上样缓冲液混合。 　　

　　

　　11.用微量移液管和一次性吸头，或细长的巴斯德吸管，或玻璃毛细管，将样品混合物缓慢添加到浸渍凝胶的样品添加孔中。分子质量标准应分别加在样品孔的左孔和右孔。 　　

　　

　　12.关闭电泳槽盖，连接电极插头。DNA应该游到阳极旁边(红色插头)。给定1~5 V/cm的电压，这里的距离是从阳极到阴极的距离。如果电极插头连接正确，阳极和阴极会因电解产生气泡，溴酚蓝会在几分钟内从加样孔迁移到凝胶中。溴酚蓝和二甲苯氰FF迁移到适当距离后停止电泳。 　　

　　

　　13.当DNA样品或染料在凝胶中迁移足够的距离时，关闭电源，拔出电极插头，打开电泳槽盖。如果凝胶和缓冲液中有溴化乙锭，用紫外灯观察凝胶并拍照。否则，在室温下将凝胶在含有溴化乙锭(0.5 g/ml)的水或电泳缓冲液中浸染30~45 min，或用电泳缓冲液1336010000稀释的SYBR金储备液浸染。 　　

　　

　　需要注意的事项 　　

　　

　　在微波炉加热溶解的过程中，要注意缓冲剂蒸发引起的胶水浓度增加。这时可以加入适量的缓冲液补足浓度。 　　

　　

　　常见问题 　　

　　

　　不同浓度的琼脂糖凝胶对核酸分离的效果不同，需要根据核酸分子的大小选择合适孔径的琼脂糖凝胶。