梯度程序给实验者带来了明显的方便，如缩短分析周期、改善峰形、增加灵敏度等。下面分享一个改变渐变程序对分析影响的案例。
《中国药典》对槐角丸系统适用性的实验条件(梯度程序表药典)；
色谱柱：惰性硅胶Ph(5um，4.6 * 250mm；猫。编号5020-01328)
流动相A: 2%冰醋酸
流动相B:甲醇-乙腈=2-1
流速：1.2毫升/分钟
样品体积：10微升
柱温：50
波长：260纳米(槐苷)，280纳米(柚皮苷，黄芩苷)
(注：以上三种物质均在两个波长有响应，以下为280nm的图例)
理论塔板数：以槐糖甙计算不少于10，000。
时间：0-23分钟，23-50分钟，51-57分钟
流动相A (%): 89 89-73 10
流动相B(% B(%)): 11 11-27 90
色谱图1-1(药典方法参考溶液280纳米)
色谱图1-2(药典方法测试溶液280纳米)
可以看出，黄岑糖苷的峰值最晚，而且还混有其他杂质。那么如何挽回呢？那就是改渐变程序！我就不细说摸索的过程了，直接说最后的结果：
时间：0-23分钟，23-50分钟，51-57分钟
流动相A (%): 86 86-65 10
流动相B(% B(%)): 14 14-35 90
色谱图2-1(优化方法参考溶液280纳米)
色谱图2-2(优化方法：测试溶液280nm)
优化成功！
仔细回顾药典方法可以发现，药典方法中黄岑葡萄糖苷的出峰时间正好处于梯度程序的清洗阶段(有机流动相在一个急剧变化阶段从27%跃升至90%)，大量残留在柱内的杂质被一起洗出，影响了黄岑葡萄糖苷的分离度。然后，当前期有机流动相B的比例适当增加时，黄岑苷可以远离杂质的怀抱，提前被洗脱。通过对比可以看出，峰形也有所改善。
再看看槐角苷的理论塔板数是否符合药典大于10000要求
完全符合药典对理论板数的要求！但是要知道药典中流动相的条件是可以在一定范围内改变的。
