原代培养是指直接从生物体中取出细胞、组织或器官，并让它们在体外维持和生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，其生物学特性变化不大，能在一定程度上反映其在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性。因此，它是药物实验，特别是药物的细胞活性、结构、代谢、毒性或杀伤作用的极好工具。常用的原代培养方法有组织块培养和消化培养。
（一）组织块培养法
很多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞容易生长。尤其是培养的心肌，有时可观察到心肌组织块的搏动。细胞从组织块边缘长出后，盖上培养皿或培养瓶，即可传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、洁净工作台/无菌室、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、汉克斯液、双抗体试液、剪刀、照相机、小烧杯。
2. 操作步骤
(1)无菌条件下，取适量待培养组织，置于小烧杯中，用适量汉克斯溶液冲洗2~3次，去除组织块表面的血渍。
(2)用眼科剪刀将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
(3)用汉克斯溶液反复冲洗，直至液体不浑浊。当组织块下沉时，倾斜烧杯，用小吸管尽可能吸出汉克斯溶液。
(4)用含20%灭活血清和双抗体溶液(200U/ml青霉素，200g/ml链霉素)的培养液再次冲洗，用吸管吸干，再加入5ml含20%血清的培养液。
(5)用肘吸管吸出小块组织，均匀地放在培养皿的内表面，吸出多余的培养液。小块组织之间的距离以0.5cm为宜。盖上培养皿，做好标记，并将其置于37的CO2培养箱中。
(6)2 ~ 4小时后，将少量上述含20%血清和双抗体溶液(100U/ml青霉素和100g/ml链霉素)的培养液缓慢加入超净工作台中的培养皿中，使组织块浸入培养液中。
(7)轻轻地将培养皿和组织块移到CO2培养箱中。如无特殊情况，无需观察。1~2周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
(9)一般来说，如果培养基没有明显变化，一周换一次培养基。当细胞长满培养皿的内表面时，可以进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
(1)如果用培养瓶代替培养皿，在培养瓶底壁接种组织块后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底在上面，盖上瓶盖，轻轻放入37c的CO2培养箱中，2 ~ 4小时后，取出培养瓶，在洁净工作台上打开瓶盖，使组织块仍在上面。在组织块对面的瓶壁上加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，将组织块浸入培养液中。盖上瓶盖，放回二氧化碳培养箱，继续培养。
(2)可以丢弃培养皿表面游离的组织块。
(3)如果用玻璃培养瓶代替新的塑料培养瓶，最好在玻璃的底面涂上鼠尾胶原蛋白，这样不仅有利于组织块的粘附，还能使细胞更好的生长。
(4)本方法适用于各种组织的培养，操作者也可根据自己的实验需要和细胞类型进行修改。
（二）消化培养法
它和上面的组织块培养法主要有两个区别。先用酶制剂(最常用的是胰蛋白酶)处理组织块，去除细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；第二，细胞生长方式多为单层。这种方法的优点是单层细胞更容易吸收营养和排泄代谢产物，因此生长更快，可以很快应用于实验研究。缺点是步骤相当复杂，而且
(2)用锋利的眼科剪刀反复切割组织块，得到大小约为0.5毫米1毫米的小片。
(3)用汉克斯溶液冲洗几次，然后组织块会下沉吸收汉克斯溶液。
(4)用少量汉克斯溶液，将小块组织吸取到预先装有无菌磁力搅拌器的锥形烧杯中，然后加入15~30ml上述胰蛋白酶消化液。
(5)用橡胶塞盖住锥形烧杯，并用锡纸密封。然后移至预先放置在37培养箱中的电磁搅拌器。
(6)打开搅拌器的电源开关，旋转搅拌器，关闭培养箱，让胰蛋白酶消化。
(7)消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴在载玻片上，在光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个细胞。如果大部分细胞已经分散，立即加入适量汉克斯溶液停止消化。一般需要10~20min消化。
(8)首先用100m不锈钢筛过滤，去除未消化的组织块或大的细胞团(如果获得的细胞量较少，可以继续消化这些组织块以获得更多的细胞)。然后用20不锈钢筛过滤。
(9)将所得滤液低速(500-1000转/分钟)离心5分钟，吸取上清液。用Hanks液离心1~2次，最后加入含血清的培养液，搅拌均匀，制成细胞悬液。
(10)用计数板计数测定细胞悬液的浓度，通常在培养瓶或培养皿中接种1105~3105个细胞。
1. 操作程序
trong>（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
