王雷医生，今天请你去上海第八人民医院。今天给大家分享一下糖化血红蛋白常见的实验室检测方法和特点。 　　

　　自20世纪70年代末第一台商业化的糖化血红蛋白自动检测仪问世以来，糖化血红蛋白的检测技术有了很大的发展，从最初的检测GHb和HbA1到现在的检测HbA1c，检测方法已经发展到几十种。目前常用的方法按其理化性质大致可分为两类：第一类是基于糖化和非糖化成分电荷的不同，如离子交换层析和电泳；第二类是基于糖化和非糖化的结构差异，如亲和层析、免疫等等。 　　

　　目前广泛使用的是离子交换色谱法，如自动离子交换高效液相色谱法(HPLC)，以A1C峰面积和A0峰面积的百分比来报告糖化血红蛋白。这类方法常见的干扰有：糖基化前体(席夫碱)、胎儿血红蛋白、衍生血红蛋白(甲酰化或乙酰化血红蛋白)和血红蛋白变体，结果容易出现偏差。随着技术的不断发展，目前很多高效液相色谱在一定程度上克服了很多影响因素，HbA1c的分离达到了临床所要求的精度和稳定性(CV3%)。美国、瑞士、日本等国家将其作为标准化参照系的参考方法。 　　

　　电泳是利用不同的电荷，不同的等电点，不同的游泳速度，对糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白进行分离和检测。但是一般电泳比较慢，设备和试剂成本比较高。近年来，毛细管电泳因其分辨率高、准确度高、抗干扰能力强、能检测HbA1c和报告其他血红蛋白成分等优点，在临床上的应用越来越受到重视。 　　

　　亲和层析的原理是硼酸盐具有与结合到血红蛋白分子上的葡萄糖的1，2-顺式二醇基团发生可逆结合反应的性质。以常用的间氨基苯硼酸琼脂糖为例：糖化血红蛋白与硼酸结合，非糖化血红蛋白不结合，先通过；然后，加入也含有顺式二醇基团的高浓度多羟基化合物(如山梨醇)，糖化血红蛋白和硼酸的结合被山梨醇取代，从而被洗脱。亲和层析法用于测定总糖化血红蛋白(不限于血红蛋白亚基与葡萄糖结合的氨基端)，所以通过换算最终报告为“HbA1c”。亲和层析的检测值虽然不受血红蛋白变异体和衍生物的影响，但不能提示样品中是否存在血红蛋白变异体等干扰。 　　

　　免疫测定法是以糖化血红蛋白珠蛋白氨基端的4-8个氨基酸为抗原，利用抗原抗体反应的原理进行测定，所以这种方法可以特异性识别HbA1c。但需要注意的是，重度黄疸、高脂血症、胎儿血红蛋白高的患者会导致检测结果偏低。理论上，这种方法不受变异血红蛋白的影响，但现在研究表明，变异血红蛋白会影响测定结果。与亲和层析一样，这种方法不能指示样品中是否存在干扰物，如血红蛋白变体。 　　

　　最后我用图表总结一下。高效液相色谱是目前临床主流技术，具有良好的重复性、自动化和高通量。它可以识别常见的血红蛋白变体，但容易受氨甲酰化的影响。毛细管电泳具有分辨率高、准确度高、抗干扰能力强等优点，但试剂设备成本高，需要批量检测。不受氨甲酰化影响的亲和层析法不能识别变异体，胎儿血红蛋白高的患者结果低。免疫测定不受氨甲酰化的影响，但易受HbS、HbC变异体的干扰和肝肾功能的影响，故测试准确性较差。 　　

　　谢谢大家。我期待下次见到你。 　　

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　　上海市医学会糖尿病分会监测与治疗学技术学组上海市医学会检验分会生化学组作者：王　蕾　上海市第八人民医院检测科 　　

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